Како направити агарозни гел

Видео: креатин киназа : изоферментов и клиническая значение: CK, CK-MB или же CK2

Садржај

Упутства
Припрема агарозног гела
Обавештење
Шта ти треба

Агарозни гелови су направљени од стране научника који раде у лабораторијама за молекуларну биологију за проучавање фрагмената ДНК који су модификовани током експерименталног рада. Техника израде агарозног гела је основна рутинска вештина коју сви истраживачи морају савладати јер омогућава директну визуализацију различитих величина ДНК за пројекте верификације и клонирања гена. Иако припрема гела није тешка, као и код свих лабораторијских процедура, треба је судити само од стране стручњака који је научно обучен због биолошких ризика.

Упутства

Како направити агарозни гел (Цомстоцк слике / Цомстоцк / Гетти Имагес)

Припрема агарозног гела

Побрините се да гел базе немају пукотине или било шта што би могло изазвати цурење вруће агарозе. Кашику очистите 70% алкохолом и оставите да се потпуно осуши. База има два отворена краја и два затворена краја. У неким форматима, клипови се испоручују са њима како би се затворили крајеви, али већина мора бити запечаћена постављањем трака између отворених дијелова. Чврсто и чврсто притисните траку, јер се они могу удаљити од држача и омогућити да врућа агароза процури.
На основу величине ДНК фрагмента који се раздваја и анализира на агарозном гелу, одредити одговарајући проценат који ће бити потребан. На пример, на 1% (в / в), агарозни гел ће бити ефикасан за анализу 0,5 до 10 кб ДНА сегмента. Што је већи проценат (више агарозе), то су мањи фрагменти који се могу раздвојити. Рутински експерименти користе опсег од 0,5% до 2% агарозе. За 1% агарозног гела, измерити 1 г агарозног праха у хемијском завоју или другом систему за задржавање. Пажљиво пренесите у лабораторијску област за препарацију гела.
У одговарајућој области за припрему гела, измерити 100 мл пуфера за електрофорезу. Треба да буде на собној температури. Пренети агарозни прах у ватроотпорну боцу и сипати измерену запремину пуфера за електрофорезу. Пажљиво загрејте смешу у микроталасној пећници, али је немојте кухати, јер испаравање може да промени проценат присутне агарозе. Уверите се да је сва агароза растворена, протресите да се добро промеша, оставите да се мало охлади и затим додајте 0,5 микрограма по милилитру етидијум бромида. Не удисати пару јер то може иритирати плућа и ткиво слузнице. Такође, не загревати раствор након додавања етидијум бромида. Поново протресите да се промеша, а затим док је раствор довољно врућ да се пролије, ставите га у припремљену базу. Треба приметити да ако је присутна велика запремина узорка или мала концентрација ДНК, може се направити дебљи гел. Међутим, финији гелови се лакше анализирају јер ће бити јасније фотографисани.
Убаците чешљеве у гел да бисте направили жлебове или бунаре за узорак који ћете поставити. Пустите да се охлади на собну температуру неколико сати или у фрижидеру на неколико минута. У овом другом случају, када је гел спреман, треба посматрати присуство кристала агарозе. Генерално, они нестају ако се гел остави да се загреје на собну температуру на пулту неколико минута пре употребе. Пажљиво уклоните чешљеве тако да не растргате гел или разбијете бунаре. Агарозни гел је сада спреман за употребу. Ако се не користи одмах, мораће се умотати у целофан или ускладиштити у пластичну посуду у фрижидеру како би се спречило исушивање или топљење.

Обавештење

Реагенси који се користе могући су карциногени и њима треба руковати пажљиво и адекватно заштитити. Ако је током припреме гела направљена грешка, она се никада не би требало поново загревати, већ елиминисати и поново припремити нови гел.