Садржај
Електрофореза на агарозном гелу је научни поступак који се користи у истраживачким и дијагностичким пројектима који укључују проучавање нуклеинских киселина. Она омогућава научнику или техничару да раздвоји наелектрисане молекуле нуклеинске киселине, као што је ДНК, у складу са њиховом величином, и користи се за анализу производа добијених експериментом, као што је ланчана реакција полимеразе. Рутински се користи јер је јефтин за рад, брз процес и омогућава опоравак анализиране нуклеинске киселине.
Прављење гела
Сакупите све потребне предмете и очистите их 70% етанолом. Ставке обухватају пладањ од гела, лепљиву траку, лабораторијску агарозу, бочице или боце, 10к концентрацију (Трис-Борат-ЕДТА, ТБЕ) пуфер, етидијум бромид, боју и узорак који се анализира. Такође се побрините да имате резервоар за електрофорезу и извор енергије. Агароза се припрема вагањем одговарајуће количине ДНК траке која се анализира, мешањем са пуфером ТБЕ и топљењем у микроталасној пећници. Уопштено, 1% до 2% раствор је довољан да покрије многе ДНК низове проучене у дневној молекуларној биологији. Мали ДНК захтевају више концентрисаних гелова, док већи од њих захтевају више разблажених гелова. Агарозни раствор је помешан са етидијум бромидом, који ће се везати за нуклеинску киселину током поступка електрофорезе. Овај раствор се сипа у посуду за талину гела, баш као што се умеће чешаљ за калупљење, а смеша се остави да се стврдне.
Убаците и активирајте гел
Гел је уклоњен из посуде и потопљен у резервоар за електрофорезу гела који садржи пуфер за извођење. Узорци за анализу су помешани са бојама и смештени у бунаре у гелу који је створен са чешљем. Маркер или скала је такође укључена да омогући истраживачу да види напредовање електрофорезе и одреди величину генерисаних фрагмената. Затим се на гел наноси електрична струја, која присиљава узорак да мигрира из једног краја гела у други. Током овог процеса, нуклеинске киселине у узорку се раздвајају на фрагменте различитих величина, при чему се већи молекули приближавају бунару, а мањи молекули прелазе на други крај гела.
Анализирајте гел
Након завршетка поступка електрофорезе, гел се уклања из резервоара и ставља у УВ трансилуминатор, који осветљава фрагменте нуклеинске киселине који се везују за флуоресцентни етидијум бромид. Ово је урађено на фотографији и траке нуклеинских киселина се могу мерити према удаљености која је мигрирала кроз гел. Скала ће их раздвојити у опсеге познатих величина и може се користити за вођење истраживача током анализе.